Какова Изоэлектрическая точка?
Белки построены из цепей аминокислот, каждая из которых имеют различные значения рН. Полный pH фактор белка составлен из смеси значений рН отдельных аминокислот, поскольку они формируют ионы в специфическом растворе, в котором они растворены. Изоэлектрическая точка (пи) белка является pH фактором, в котором у того белка нет никакого чистого налога. Это свойство может эксплуатироваться, чтобы отделить белок с известным пи от других белков в разнородной смеси.
Аминокислоты имеют амино концевую группу, которая является основной, имея высокий pH фактор. Другой конец аминокислоты - терминал карбоксильной группы, который является кислым, с низким pH фактором. В отличающихся значениях рН аминокислоты на белках изменятся в их налогах. У белков ниже их изоэлектрической точки есть положительный заряд. Напротив, у тех выше этого пункта есть отрицательный заряд.
Чтобы эксплуатировать знание изоэлектрической точки для очистки белка, смесь белков подвергнута электрическому полю. Это обычно делается в агарозе или полиакриломидных гелях, и известно как изоэлектрическое сосредоточивание. Более старая методика должна выполнить процедуру в более крупном масштабе в стеклянном позвоночнике, используя раствор сахарозы с электродами на каждом конце. Составы звонили, амфолиты добавлены, которые вызывают формирование последовательного градиента pH фактора. Когда гель или позвоночник подвергнуты электрическому току, белки мигрируют, пока они не достигают своей изоэлектрической точки, и затем остаются неподвижными.
Белки на гелях вообще сделаны видимыми краской, которая связывает белки. Иногда, если ферменты изучаются, субстрат может использоваться, который дает цветную реакцию. Обычно стандарты используются, у которых есть белки известных изоэлектрических точек.
Как только каждый знает, где желаемый белок расположен, общая методика, должен сократить изолированный белок из геля. Белок может тогда быть очищен и упорядочен. Как только последовательность известна, она может использоваться, чтобы проектировать праймеры для цепной реакции полимеразы (pcr) и использоваться, чтобы имитировать ген для белка, если подходящий материал нуклеиновой кислоты доступен.
Изоэлектрическое сосредоточивание - также распространенный способ проанализировать тесно связанные белки, чтобы видеть, насколько отличающийся они друг от друга. Одно осложнение может состоять в том, что белкам можно было связать сахар им. Это называют гликозилированием и может воздействовать на protein пи с. Это может быть похоже, что есть многократные белки с различными изоэлектрическими точками, когда фактически есть только один белок, который был дифференцированно glycosylated. Белки, очищенные стандартными методами, такими как хроматография, иногда анализируются изоэлектрическим сосредоточиванием, чтобы гарантировать их чистоту.